Autismo /PDD

 Procedimentos da Conferência Nacional da Sociedade do Autismo em 1996

O que segue são os procedimentos da conferência nacional da Sociedade do Autismo que aconteceu em 10-13 de julho de 1996 em Milwaukee, Wisconsin. O material incluído aqui revela alguns dos assuntos científicos e técnicos pertinentes em prova de ácido orgânico para crianças com autismo.

Teste de Ácido orgânico para avaliar MetabolitasMicrobiano Anormal em Urina de Crianças com Autismo

Tentativa Clínica antifungal
Efeito de Terapia de Nistatina
Mesa 1 - Efeito de 10 Dias de Terapia de Nistatina
Mesa 2 - Efeito de 70 Dias de Terapia de Nistatina
Efeito de Terapia de Flagil
Mesa 3 - Efetue de Terapia de Flagyl
Avaliações de Melhoria Clínica
Discussão
Referências

Experimente com Prova de Ácido Orgânica para Avaliar MetabolitasMicrobiano Anormal na Urina de Crianças Com Autismo

Durante os últimos dois anos, nós avaliamos por gás-cromatografia massa-espectrometria anormalidades bioquímicas que parecem ser de origem microbiana em testes de urina de crianças com autismo e outras desordens desenvolventes. Nosso interesse neste fenômeno começou quando nós achamos que certo metabolita microbiano putativo apareceu em valores mais alto que valores normais em amostras de urina de dois irmãos com autismo (1).

Estes achados eram de interesse especial a nós por causa de um relatório que as crianças autistas têm uma maior incidência de infecções de ouvido que outras crianças da mesma idade; que crianças autistas com baixo funcionamento têm infecções do ouvido mais cedo que outras crianças; e que as orelhas de crianças com autismo eram anatomicamente posicionados diferentemente que orelhas de crianças normais, levando talvez a maior suscetibilidade de infecção do ouvido (2). são documentados bem o crescimento de levedura intestinal e bactérias anaérobicas sequelae resultante de antibióticos orais comuns que tratam infecções do ouvido (3-10).

Então nós consideramos a possibilidade que os produtos bioquímicos de microorganismos anormais podem representar um papel na etiologia do autismo da mesma maneira que elevações anormais de fenilalinina e seu metabolitas causam PKU. Certos metabolitas que tinha sido identificado previamente em amostras de urina inclui ácido tartárico e ácido citrimálico. Outras combinações que nós identificamos pela primeira vez em amostras de urina incluíram carboidrato de arabinosa(a), ácido 3-metilmálico, ácido 3-oxoglutárico, ácido fenilcarboxílico, e ácido de carboxicítrico (1).
Desde então nós identificamos várias compostos adicionais comumente aumentado nas amostras de urina de crianças com autismo inclusive ácido dihidroxifenilpropiciônico, furandicarboxílico, hidroximetilfuróico, e furancarbonilglicínia. Nós suspeitamos que a maioria dos compostos acima era de origem microbiana baseado em relatórios que demonstraram a presença destas combinações ou bioquímicos próximo relacionado na mídia de cultura de levedura,bactérias fungi (1, 11-13).

Durante este período de tempo, nós juntamos informação sobre estes compostos e o papel possível em autismo:

Administrando uma tentativa clínica formal descontrolada de terapia de droga antifungal que envolveu 23 crianças com autismo que foi visto como não-pacientes no hospital;

Oferecendo referência de testes de laboratório para médicos que usaram esta prova para avaliar possíveis erros inatos metabolismo como também Metabolitasmicrobiano anormal putativo;

Fazendo testes em mídia de cultura de microorganismos diferentes para determinar quais combinações foram produzidas através de espécie diferente.

Antifungal Tentativa Clínica

Uma proposta de pesquisa foi traçada para determinar:

1. se a excreção urinária dos metabolitas do ciclo de Krebs e/ou anormal carboidrato anormais são características bioquímicas em crianças autistas e
   
   
2. se tratamento antifungal resulta na diminuição ou eliminação dos metabolitas anormais do ciclo de Krebs, como ácido dihidroxifenilpropiciônico, ácido fenilcarboxílico, e carboidratos.

O estudo foi aprovado pela Revisão do Conselho Investigador do Hospital de Clemência das Crianças. Financiamento para os estudos foi provido por concessões pela Fundação Katherine B. de Richardson, da Corporação Farmacêutica Pfizer, e os pais de uma criança autista.

Foram se cadastradas vinte e três crianças autistas para o estudo. Cada criança foi classificada como autista de acordo com o mais recente critérioproposto pela Associação Psiquiátrica Americana DSM-IV (1994). Depois de consentimento informado, uma amostra de urina fortuita foi coletadasem preparação especial para análise de ácido orgânica através de espectrometria de cromatografia/massa de gás.

Se a urina mostrasse que a presença metabolitas anormais do ciclo de Krebs, carboidrato anormais elevados, a criança seria oferecida tratamento de infecção de levedura suspeitada com Micostatina (Nistatina S) 100,000 unidades q.i.d. oralmente por 10 dias e outra amostra de urina fortuita obtidas e analisada para ácidos orgânicos. Se a segunda amostra de urina ainda mostrasse a presença de metabolitas anormal, a criança seria oferecida um segundo curso de tratamento com Micostatina por 2 meses e outra amostra de urina seria testada. Se ainda mostrasse ácidos orgânicos anormais, a criança seria oferecida a entrar em tratamento com fluconazole (Diflucan) 2 mg/kg/dia como uma única dose diariamente durante 2 semanas. Um segundo curso de duas -semanas de tratamento seria oferecido se metabolitas anormais ainda estivessem presentes na urina e a função de fígado fosse satisfatória baseado em atividades de transaminase de soro antes e depois de terapia de fluconazole. Uma amostra de urina fortuita seria obtida duas semanas depois e seria analisada para ácidos orgânicos. Uma amostra de urina adicional seria coletada quatro semanas depois do fim de terapia para determinar a duração de qualquer normalidade bioquímica associada com terapia de droga.

Cada valores de urina do paciente serviram como controles. Urina de 20 crianças normais de empregados de laboratório serviram como controles normais adicionais. Uns 50 controles normais adicionais foram coletados e os dados seriam disponíveis para a reunião. Uma análise da severidade de comportamentos autistas foi feita por ambos um psicólogo pessoal que trabalha com um pai e por um professor (se a criança estivesse em escola ou pré-escolar) usando a escala de CARS escalam (Medidor de Autismo de Infância ) Esta análise foi duas vezes: antes de começar a terapia e ao término da terapia. O uso de dois avaliadores foi empregado para aumentar a confiabilidade deste teste. Além disso, pais e professores são indivíduos que normalmente observam a criança por maior tempo que aualquer outra pessoa.

Efeito de Terapia de Nistatina

A Mesa debaixo demonstra as mudanças em ácidos orgânicos da urina depois de 10 dias da terapia com Micostatina.

Mesa 1 - Efeito de 10 Dias de Terapia de Nistatina em Ácidos Orgânicos Urinários de Crianças com Autismo

* Compostos indicados com um asterisco estão em unidades/mol de creatinina; os outros são mmol/mol de creatinina.

Como indicado na mesa 1, os valores medios de todos os compostos acima com a exceção do ácido fenilcarboxílico, diminuíram com os 10 dias de terapia com Nistatina. O valor mau do composto de fenilcarboxílico de fato aumentado por 89.3% depois da terapia de Nistatina (p=0.05 através de t-teste emparelhado).
A diminuição da porcentagem para ácido dihidroxifenilpropiciônico e furancarbonilglicínia é relativamente pequeno e é ou significado estatístico marginal. A diminuição da porcentagem para aos compostos adicionais é maior (36.3-69.8%) com maiores graus de significado estatístico pelo t-teste emparelhado. Por favor note que os resultados de quatro pacientes não são incluídos, pois esses foram atrasados e não foram incluídos na análise final.

Mesa 2 - Efeito de 70 Dias de Terapia de Nistatina em Ácidos Orgânicos Urinários de Crianças com Autismo

* Compostos indicados com um asterisco estão em unidades/mol de creatinina; os outros são mmol/mol de creatinina.

70 dias depois da terapia de Nistatina, valores médios para dez das treze combinações diminuíram. Os valores médios para 3-oxoglutárico, VMA analógico, e fenilcarboxílico composto ácido aumentaram depois de 70 dias de terapia de Nistatina.

A diminuição da porcentagem de ácido dihidroxifenilpropiciônico era leve (11.8%) e era de significado estatístico marginal. A mudança da porcentagem dos valores médios comparados ao patamar variado de 39.9-87.9 para as combinações restantes com valores de p do t-teste emparelhado que varia de 0.02-0.13. (O valor de p é a probabilidade que os valores diminuídos estão devido a chance.)

A diminuição marginal em ácido dihidroxifenilpropiciônico levou à suspeita de que este composto não era de origem fungal. Teste foi executado em vários pacientes ao pedido do médico assistente que tinha suspeitado ou confirmado infecções de Clostridia e foi tratado com metronidazole (Flagil). Nós testamos alguns destes pacientes antes e depois de terapia de metronidazole e achamos uma diminuição dramática na concentração deste composto do patamar nestes pacientes depois de terapia de droga.

Efeito de Terapia de Flagil

Como mostrado na Mesa 3, há uma diminuição dramática na concentração ácido dihidroxifenilpropiciônico urinário depois de doses padrão do antibiótico Flagil. Em todos os quatro pacientes, as concentrações de ácido dihidroxifenipropionico diminuíram 99% ou mais depois de dois a três semanas nesta droga. No primeiro paciente acima da série, ácido de dihidroxifenilpropiciônico aumentou seguindo a cessação tratamento de Flagil. 

Mesa 3 - Efetue de Terapia de Flagyl em Excreção Urinária de Ácido de dihidroxifenilpropiciônico

*Medido em mmol/mol de creatinina.

Avaliações de Melhoria Clínica

Treze dos professores e pais de seis das crianças autistas completaram avaliações de CARS ambos antes e depois de terapia com Nistatina.
A médias de CARS antes da terapia era 37.3 (DP = 4.2) que é avaliado como autismo severo enquanto a média de CARS tiradas depois da terapia foi 32.6 (DP=5.1), uma avaliação de moderado autismo.
Esta diferença foi avaliada como extremamente significante pelo t-teste emparelhado (p <.001).

Melhorias citadas por pais e professores incluem diminuição de hiperatividade, mais contato de olho, vocalização aumentada, padrões de sono melhores, concentração melhor, jogo imaginativo aumentado, comportamentos estereotípicos reduzidos (como girar objetos), e desempenho acadêmico melhor.

Discussão

Nós não estávamos conscientes de um possível papel de metabolitas de bactérias anaeróbicos no autismo até que nosso estudo de pesquisa formal estava completo. O crescimento de bactérias anaeróbicas pode ser um fator complicado no uso de terapia antifungal para tratamento de autismo.

Em vários casos, concentrações de ácido dihidroxifenilpropiciônico aumentaram depois da terapia antifungal. É possível que bactérias anaeróbicas possam ter iferado quando fungos e/ou leveduras foram reduzidos no ecossistema microbiano.

Se produtos de levedura/fungos e produtos de bactérias anaeróbicas são envolvidos no mecanismo de autismo, terapias antimicrobial mais complexas podem ser necessárias para restabelecer uma ecologia microbiana equilibradana área gastrintestinal, talvez através de "replantando" a área gastrintestinal com bactérias benéficas como acidophilus de Lactobacillus. Tal terapia demonstrou efetivo no tratamento de indivíduos com infecções Clostridia difficile reincidentes (14).

A diminuição marcada em ácido dihidroxifenilpropiciônico depois do tratamento com Flagil, agente antibacterial com especividade para bactérias anaeróbicas e nenhuma propriedade antifungal (15,16) é consistente com a produção desta combinação por uma ou mais espécie de bactérias anaeróbicas.

Ácido Fenilpropiciônico e ácido de monohidroxifenilpropiciônico que são bioquimicamente muito relacionado a este composto são produzidos por várias espécie de Clostridia (17). Nós porém não identificamos este composto em múltipla cultura mídia nas quais espécie múltipla de Clostridia seja culta.

Nosso fracasso para isolar o ácido dihidroxifenilpropiciônico * de puras culturas de Clostridia poderia ter acontecido devido a múltiplas razões:

• Um precursor da combinação como ácido monohidroxifenilpropionico pode ser produzido pelas bactérias anaeróbicas e então pode ser convertido em ácido dihidroxifenilpropiciônico por outros microorganismos através do metabolismo humano.
  
  
  
  
• As bactérias anaeróbicas que produzem esta combinação podem ser difíceis de crescer em vitro.
  
  
  
  
• A mídia de cultura para este organismo podenão prover os nutrientes precisos para a biossíntese deste composto por este organismo. Nós estávamos muito interessados em um possível papel no mecanismo de autismo para esse composto, porque é bioquimicamente relacionado aos neurotransmissores dopamina e norepinefrina e porque é inibidor da dopamina descarboxilase, o enzima responsável pela conversão da DOPA para dopamina (18)

* Esta combinação foi recentemente identificado como 3-(3-hidroxifenil)-3-hidroxi ácido propionico.

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